一、核查对象

标准储备菌株、工作菌株（如大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等检测常用菌株），核查周期建议每3-6个月1次，或在菌株传代≥3次、储存条件变更后补充核查。

二、核心核查项目及方法

1. 纯度验证

- 操作：取菌株接种至营养琼脂平板（36℃±1℃培养24-48h），观察菌落形态（颜色、大小、边缘、隆起度）是否均一，无杂菌菌落（如杂菌可通过革兰氏染色进一步确认）。

- 判定：菌落形态一致，革兰氏染色结果与菌株特性匹配，即为纯度合格。

2. 生化特性验证

- 操作：根据菌株种类选择对应的生化鉴定试剂盒（如大肠埃希氏菌需检测乳糖发酵、靛基质试验等；金黄色葡萄球菌需检测凝固酶试验、甘露醇发酵等），按试剂盒说明书操作。

- 判定：生化反应结果与菌株标准特性（如GB 4789系列标准、ATCC菌株说明书）一致。

3. 活性验证

- 操作：将核查菌株按10倍梯度稀释至适宜浓度，取0.1mL接种平板，36℃±1℃培养48h，计数菌落数（CFU/mL）。

- 判定：菌落数在10⁶-10⁹ CFU/mL范围内（符合菌株储存的活性要求），且与上次核查结果无显著差异（偏差≤1个数量级）。

4. 特异性验证（针对检测用指示菌株）

- 操作：若菌株用于特定项目检测（如大肠菌群检测用大肠埃希氏菌），需将其接种至对应选择性培养基（如伊红美蓝琼脂），观察特异性生长情况（如大肠埃希氏菌在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色带金属光泽菌落）。

- 判定：选择性培养基上生长特性符合标准，无异常。

三、结果判定与处理

- 合格：纯度、生化特性、活性、特异性均符合菌株标准要求，可继续使用。

- 不合格：若出现杂菌污染、生化反应异常、活性显著下降，需立即停用该菌株，启用备份菌株，并追溯污染或变异原因（如传代操作、储存条件）。

四、关键要求

- 核查全程无菌操作，使用经校准的培养箱、移液器，培养基符合GB 5750.12-2022标准。

- 记录完整：留存核查日期、操作人员、菌落形态照片、生化反应结果、计数数据，建立菌株核查档案。